慢速降温保存通常采用“两步法”，快速程序降温仪，即步先将生物样品采用某个较慢的降温速率降温到 -80℃并维持一段时间，然后第二步再将己经处于 -80℃状态的生物样品直接投入液氮罐里（ -196℃）进行深低温的长期保存。慢速降温法的实质是使用较慢的降温速率，使得降温过程中细胞内的水逐渐脱离细胞，以达到减少细胞内冰晶形成的概率的目的，从而提高细胞的存活率。他的优势是所用的冷冻保护剂浓度较低，程序降温仪器厂家，只需要3%-20%左右，但容易造成冷损伤和渗透压失衡。
细胞冷冻保存，1. 材料：生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO (Sigma D-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、细胞冻存程序仪(也称为程序降温仪。冷冻保存方法：(1)传统方法: 冷存管置于4 ℃10分钟---gt;-20 ℃30分钟---gt;-80 ℃ 16～18小时(或隔夜)---gt;液氮槽vaporphase长期储存。-20 ℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量，亦可跳过此步骤直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。(2)程序降温：利用已设定程序的等速细胞冻存程序仪以-1～-3 ℃/分钟之速度由室温降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
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