细胞往往会在温度剧烈变化中。通过使用细胞欣谕程序降温仪,选择合适的冻存液,设定合适的升降温速率,可有效地克服上述不利因素。实践证明,(经温度补尝后)每分钟1-3℃的冷冻速率可大大提高冻存细胞的存活率。传统的生物样本降温通常采用-80℃低温冰箱进行分步骤冷冻,该方法的不足为:耗时长,整个降温过程大约需要一天的时间;在降温过程中需要人为多次转移,自动化程序降温仪,给样本的降温带来众多不可控因素,从而导致样本的存活率降低;无法有效地消除结晶过程中释放的潜热,增大了样本的率。
程序降温仪主要组成部分:整套程序降温仪有3大部件组成,依靠数据线,链接软管等组成一整套智能程序控温设备,这样的一整套设备我们称之为程序降温仪,也叫程序控制冷冻装置。电脑系统本仪器以电脑作为主控设备。 电脑系统包括主机、彩色显示器、键盘和有关应用软件。不锈钢主机箱箱体的内外壁都是不锈钢材料。箱的前部是具有良好保温性能的冷冻室。标配室内安装了温度传感器和搅匀循环风扇。还配有样品架屉。冷冻中被冻样品即放置在样品架上。
步骤:(1)冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。(2)配制冷冻保存溶液(使用前配制):另取一离心管,加入培养基、,合肥程序降温仪,逐滴加入二亚砜 (DMSO)至20%浓度,即制成双倍的冻存液,置于室温下待用。(3)离心收集培养之细胞,用加的培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约0. 1 ml)计数细胞浓度及冻前存活率。(4)取与细胞悬液等量的冻存液,程控降温仪,缓慢逐滴加入细胞悬液,并晃动试管,制成细胞冻存悬液(DMSOzui后浓度为5~10%),使细胞浓度为1~5×106cells/ ml,混合均匀,全自动程序降温仪,分装于已标示完全之冷冻保存管中,1~2 ml/vial,并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后,注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。
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